Cell Titer-Glo 的正确打开方式——从外到内量化细胞活力（转载）

现如今，生物学检测方法更新迭代的速度很快，每年都会有各种各样的试剂盒和检测方法面世，其中，作为生物体生长发育的基础，细胞增殖的检测方法也在不断的发展。

细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下，通过 DNA 复制、RNA 转录和蛋白质合成等复杂反应而进行的分裂过程。细胞增殖检测技术已广泛应用于分子生物学、遗传学、肿瘤生物学、免疫学、药理和药代动力学等研究领域。单细胞生物以细胞分裂的方式产生新个体，多细胞生物以细胞分裂增值的方式产生新的细胞，从而补充体内衰老和死亡的细胞。活细胞在总细胞中所占的百分比叫做细胞活力。

三磷酸腺苷( Adenosine Tri-Phosphate, ATP )是自然界中各种生命活动中共用的能量载体，是能量储存和转移的zui小单位。ATP 参与生物体内多种酶促反应，维持正常的生命活动，是活细胞新陈代谢的一个指标，ATP 的含量直接反应了细胞的数量及细胞状态。通过检测 ATP 含量，可以检测出细胞活力和增值的情况。

检测细胞存活与增殖的方法主要包括观察 DNA 合成含量和检测细胞代谢活性两种，前者主要是 DNA 前体物质（胸腺嘧啶核苷类似物）掺入法，比如 BRDU 、 EDU 法；后者主要为 MTT 、XTT 、MTS 、CCK-8 、WST-1 及 WST-8 法等，同普通的 MTT、CCK8 法相比，Cell Titer-Glo 荧光素酶通过定量存在的 ATP 产生耀光效应，产生的荧光信号与存在的 ATP 量成正比，而 ATP 的量与培养物中的活细胞数成正比。Cell Titer-Glo 发光活细胞检测系统的检测试剂具有很高灵敏度和较长的信号持续时间，此系统已经广泛地应用在生命科学研究领域中，如一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，各实验室已普遍使用此技术。

Molecular Devices 的 SpectraMax 系列酶标仪化学发光检测功能可以进行基于Cell Titer-Glo发光活细胞检测系统检测 ATP 变化的细胞活力，检测时其功能表现出超 Cytotoxicity assay 高灵敏性，检测下限可至 10 个细胞每孔。可通过专业级别的 SoftMax Pro 软件进行四参数拟合，随后直接计算出 IC50 值。软件可以自动优化微孔板的检测高度，帮助用户获得较优的信号值。

然而 Cell Titer-Glo 检测系统毕竟只能得到裂解后细胞均质的荧光强度值，虽然这个值也能十分准确的反应处理对细胞活力的影响和细胞增殖情况，但这套方法并不能直接反应细胞具体的形态变化。因此，在实际实验操作过程中，尤其是高通量筛选等批量实验过程中，科学家们还是会选择结合成像的方法来确证实验有效性，多维度的还原细胞在处理后的真实变化。基于这个应用，Molecular Devices 的个人型高内涵 ImageXpress Pico 作为成像类的设备提供高质量的图片和分析补充，在酶标仪读值的基础上进一步确认细胞的生长状态，为您的实验保驾护航。